HPLC儀器驗證是一個係統性的過程，遵循生命周期概念，包括設計確認、安裝確認、運行確認和性能確認四個階段。

一、驗證的法規依據與目的

目的：

確保儀器從安裝到整個生命周期內都能持續穩定運行，產生可靠、準確的數據。

滿足藥品生產質量管理規範、實驗室質量管理規範等法規要求。

降低因儀器問題導致的分析失敗、產品召回或合規風險。

主要法規/指南：

USP通則：特別是 <1058> 分析儀器確認，將HPLC歸類為B級儀器，需要進行完整的IQ/OQ/PQ。

GMP/GLP：藥品生產質量管理規範/藥品非臨床研究質量管理規範。

ICH Q2(R1)：分析方法驗證的指導原則（雖然主要針對方法，但PQ與其緊密相關）。

表1.HPLC儀器驗證核心法規與目的表

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二、驗證的四個階段

以下是針對HPLC儀器的四個驗證階段的詳細說明：

1. 設計確認

定義：在采購儀器前，確認儀器的設計規格和功能能夠滿足用戶的需求和預期的分析任務。

主要內容：

明確分析需求（如靈敏度、精度、流速範圍等）。

評估不同供應商的儀器規格書（泵的精度、檢測器的線性範圍和噪音、自動進樣器的交叉汙染等）。

確認供應商的資質和售後服務。

形成用戶需求說明文件。

輸出：用戶需求說明、供應商評估報告、采購訂單（包含技術規格）。

2. 安裝確認

定義：確認儀器已按照製造商的規格正確交付、安裝，並且安裝環境符合要求。

主要內容：

到貨檢查：核對裝箱單，確認所有組件（泵、自動進樣器、柱溫箱、檢測器、工作站軟件、備件等）齊全且無損壞。

安裝環境：檢查電源、接地、環境溫度/濕度、實驗台穩固性、排風等是否符合要求。

文件檢查：收集並歸檔所有必需文件，如操作手冊、軟件備份、安裝圖紙、合格證等。

軟件確認：記錄工作站的軟件版本，確認其已正確安裝並授權。

連接檢查：確認各模塊之間連接正確，管路無泄漏。

輸出：IQ檢查清單、相關文件歸檔記錄。

3. 運行確認

定義：確認儀器的各項功能在指定的操作範圍內能按照製造商的設計正常運行。

主要內容（使用標準品或特定工具進行測試）：

輸液泵：

流速準確性：在不同流速下（如0.5, 1.0, 2.0 mL/min）測量實際流速，與設定值比較。

流速精密度：在固定流速下，多次測量流速的RSD。

壓力脈動和穩定性：觀察壓力波動情況。

自動進樣器：

進樣準確性：注入不同體積的標準品，考察峰麵積的RSD。

進樣精密度：多次注入同一體積標準品，考察峰麵積的RSD。

攜帶汙染：先注入高濃度樣品，緊接著注入空白溶劑，檢查空白譜圖中是否有殘留峰。

柱溫箱：

溫度準確性與穩定性：使用校準過的溫度探頭測量柱溫箱內實際溫度，與設定值比較，並考察其波動範圍。

檢測器（以常用的UV/Vis檢測器為例）：

波長準確性：使用具有特征吸收峰的標準物質（如 holmium oxide 濾光片）驗證實際波長與顯示波長是否一致。

噪音和漂移：在指定條件下（如254nm， 0 AUFS）運行基線，測量短期噪音和長期漂移。

線性範圍：注入一係列不同濃度的標準品，考察響應值與濃度的線性關係（相關係數R²）。

係統整體：

梯度準確性：通過特定測試（如低壓梯度或高壓梯度測試）驗證梯度比例的實際值與設定值的一致性。

輸出：OQ測試方案和報告，包含所有原始數據和可接受標準。

4. 性能確認

定義：在OQ完成後，使用與未來實際分析方法相似的條件，模擬實際分析過程，證明整個係統在特定實驗條件下持續符合預定的性能標準。

主要內容：

配製一個係統適用性測試溶液，該溶液通常包含待測物和幾個已知雜質，或一個特定的標準品混合物。

在常規分析條件下運行該係統適用性測試溶液。

評估關鍵的係統適用性參數，這些參數通常直接引用自藥典或分析方法：

色譜柱柱效：計算理論塔板數。

分離度：考察關鍵峰對之間的分離度。

拖尾因子：檢查主峰的對稱性。

保留時間的重複性：多次進樣，考察保留時間的RSD。

峰麵積的重複性：多次進樣，考察峰麵積的RSD。

關鍵點：PQ不是一次性的，應在每次重大維修、關鍵部件更換後重新執行，並建議定期（如每季度或每半年） 進行，作為持續驗證的一部分。

輸出：PQ測試方案和報告，包含色譜圖和係統適用性計算結果。

表2.HPLC驗證四階段核心信息表

表3.OQ階段各模塊測試項目表

三、驗證周期與再驗證

在以下情況下，需要進行再驗證：

定期再驗證：根據風險評估結果，製定定期PQ計劃（如每6個月或12個月）。

儀器移動或搬遷後。

重大維修或關鍵部件更換後（如更換泵頭、檢測器流通池、升級主板等）。

出現係統性故障，懷疑儀器性能時。

表4.再驗證觸發條件與周期表

HPLC驗證是一個嚴謹的、有文件記錄的科學過程。它確保了分析數據的ALCOA+ 原則（可歸因、清晰、同步、原始、準確，外加完整、一致、持久、可用）。

高效小黄鸭官网下载驗證常見問題

Q1: 儀器驗證到底應該由誰來做？是儀器供應商還是小黄鸭福利导航自己的實驗室？

A: 通常是雙方協作的模式。

供應商：通常負責提供標準的IQ/OQ服務（作為安裝服務的一部分），他們擁有專業的工具、標準品和協議，能高效完成基礎驗證。

實驗室/用戶：是驗證的責任主體。你需要負責：

定義用戶需求。

審核並批準供應商提供的驗證方案和報告。

執行或參與PQ（性能確認），因為PQ需要模擬你的實際分析方法。

負責日常的持續驗證和再驗證。

關鍵：絕不能認為“供應商做完了，驗證就結束了”。實驗室必須掌握並理解整個驗證過程和結果。

Q2: 驗證的可接受標準應該怎麽定？可以直接用廠家標準嗎？

A: 可以，但需經過評估和批準。

默認標準：在無特定法規或方法要求時，直接采用儀器廠家在OQ/PQ協議中提供的、基於儀器設計規格的標準是常見且可接受的。這些標準通常比法規要求更嚴格。

更嚴標準：如果您的分析方法對某項指標有特殊要求（例如，方法要求極低的進樣精度），您可能需要製定比廠家標準更嚴格的可接受標準。

法規引用：對於PQ，標準通常直接引用藥典（如USP、EP）或內部方法中規定的係統適用性要求。

核心原則：所有標準必須在驗證開始前在方案中明確定義，並獲得批準。

Q3: 多長時間需要做一次再驗證？PQ的頻率如何定？

A: 沒有“一刀切”的規定，應基於風險評估。

觸發式再驗證：

儀器經過重大維修或關鍵部件更換後（必須做）。

儀器搬遷後（必須做）。

數據出現係統性偏差，懷疑儀器性能時。

定期再驗證：

通常建議每6個月或12個月進行一次完整的PQ。

頻率取決於：儀器使用頻率、分析任務的關鍵程度、儀器的曆史性能穩定性等。一台每天高強度使用的QC儀器，其PQ頻率應高於一台偶爾使用的研究型儀器。