做實驗的同行們，估計都遇到過液相色譜壓力“鬧脾氣”的時候。壓力曲線像過山車一樣上躥下跳，數據沒法看，實驗進度卡殼，心裏那個急啊。今天咱們就來聊聊這個常見問題，從現象到原因，再到解決辦法，一步步幫你理順。

一、先看看壓力不穩長什麽樣

壓力不穩通常分兩種：一種是壓力有規律地周期性波動，另一種是壓力毫無規律地亂跳。前者往往指向某個係統部件的問題，後者可能是多因素疊加。

直觀的就是看實時壓力曲線——正常的應該是一條平穩的直線，波動範圍通常不超過設定壓力的1%-2%。如果曲線開始“跳舞”，那就要開始排查了。

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二、常見原因逐個數

1. 流動相裏的“小氣泡”

這是常見的原因之一。流動相脫氣不徹底，或者溶劑瓶裏的溶劑快用完了，都容易引入氣泡。

怎麽判斷？觀察壓力波動往往沒有規律，同時伴隨著基線噪聲增大。如果是purge閥或在線脫氣機工作異常導致脫氣不足，壓力波動可能更明顯。

2. 泵的問題

單泵或二元泵的某一個泵頭出問題，都會導致壓力不穩。

單向閥故障：閥球被汙染卡住，或者閥座磨損。這時壓力往往會有規律的周期性波動，頻率與泵的衝程一致。

柱塞杆或密封圈磨損：可能導致滲漏，壓力上不去且波動。

比例閥或混合器問題（對二元泵而言）：會導致混合不均勻，壓力波動。

3. 進樣器漏液

進樣針或針座磨損、轉子密封圈損壞，都會導致微量滲漏。這種波動往往在進樣時或進樣後更明顯。

4. 色譜柱“堵了”或“塌了”

柱頭篩板堵塞、柱床內有空隙或塌陷，會導致流動不暢，壓力異常升高且不穩。如果柱效明顯下降，伴隨峰形異常，要優先懷疑柱子。

5. 檢測器流通池有氣泡

流通池內有微小氣泡通過，會造成壓力波動和基線噪聲。通常觀察檢測器信號會更明顯。

6. 管路連接處微滲漏

特別是高壓部分的接頭，哪怕極微小的滲漏，也會導致壓力不穩。有時滲漏很慢，肉眼看不到液滴，但壓力已經受影響。

表1.HPLC壓力不穩常見原因表

三、一步步排查，快速定位問題

第一步：簡化係統

卸下色譜柱，換上兩通（union）連接管路，觀察壓力。如果壓力平穩，問題很可能在色譜柱；如果不穩，問題在柱前係統（泵、進樣器、管路等）。

第二步：分段檢查

檢查流動相：是否新鮮配製、充分脫氣？換個新配的流動相試試。

檢查溶劑瓶：液位是否足夠？吸濾頭是否堵塞？輸液管裏有沒有連續的氣泡？

檢查泵：運行每個泵單獨purge，聽聲音是否正常，觀察出口液流是否連續。如果有條件，可以測試每個泵的流量準確性。

檢查進樣器：多次進樣空白，觀察壓力波動是否與進樣動作相關。

檢查管路接頭：用紙巾仔細擦拭每個接頭，看是否有濕潤痕跡。

第三步：關注細節

室溫是否穩定？溫度波動大會影響流動相粘度，進而影響壓力。

近是否更換過流動相？不同溶劑的粘度、可壓縮性不同，壓力會有變化，這可能是正常的。

儀器是否長時間未用？可能是密封圈幹縮導致微滲漏。

表2.HPLC壓力不穩係統排查步驟表

四、針對性解決辦法

對氣泡問題：

充分脫氣：超聲、抽濾、通惰性氣體（如氦氣），並用好在線脫氣機。

保持溶劑瓶液位，及時添加。

適當提高係統壓力（如加個背壓管），減少氣泡形成。

對泵問題：

清洗單向閥：拆下用異丙醇超聲清洗，或者用專用工具衝洗。

更換密封圈：這是常規耗材，按使用時長定期更換。

聯係工程師：如果是比例閥、混合器或泵頭其他問題，可能需要專業維修。

對進樣器問題：

清洗或更換進樣針、針座。

更換轉子密封圈（通常建議定期更換）。

對色譜柱問題：

嚐試反向衝洗柱子（注意柱子是否允許）。

更換柱頭篩板或修剪柱頭（有一定風險，需謹慎）。

如果柱效嚴重下降，考慮更換新柱。

對漏液問題：

重新擰緊接頭（不要過度用力，以免損壞）。

更換損壞的管路、接頭或密封件。

五、養成良好的習慣，預防為主

流動相要幹淨：用HPLC級溶劑，水要用超純水，流動相過濾、脫氣不能省。

儀器要愛惜：避免突然的壓力變化，更換流動相時要緩和過渡。

耗材定期換：密封圈、針座、濾頭等，按廠家建議或實際使用情況定期更換。

柱子好好用：樣品要幹淨，用保護柱，避免突然的高流速衝擊。

用完好好收：長時間不用，要按規程清洗、保存係統。

表3.HPLC壓力不穩預防措施表

液相色譜壓力不穩是個“綜合征”，可能原因很多，但隻要有條理地排查，大多數問題都能解決。平時多觀察儀器狀態，做個實驗記錄，時間長了，你一聽聲音、一看曲線，大概就能猜到問題在哪。實驗不易，且做且珍惜。希望這些經驗能幫你少走點彎路，實驗順利，數據漂亮！

常見問題(FAQ)

Q1：壓力波動總是發生在實驗開始後半小時左右，可能是什麽原因？

這個問題很可能與溫度平衡有關。實驗室環境溫度或柱溫箱溫度未充分穩定時，流動相和色譜柱的溫度會持續變化，導致粘度變化，從而引起壓力漂移或波動。特別是使用乙腈-水體係時，混合過程會吸熱，溫度影響更明顯。

解決辦法：

實驗前，提前打開柱溫箱，讓色譜柱在設定溫度下平衡至少30分鍾。同時，讓流動相以較小流速（如0.2-0.5 mL/min）在係統中循環10-15分鍾，使整個流路溫度達到平衡，再進行正式分析。此外，檢查實驗室空調出風口是否直接對著儀器，避免局部溫度波動。

Q2：壓力突然降到零，然後又恢複正常，偶爾發生，怎麽回事？

這種“斷崖式”下跌然後恢複，常見的原因是泵頭或管路中存有微小氣泡。氣泡進入高壓泵頭後，在壓縮瞬間無法形成有效壓力，導致壓力驟降；當氣泡被排出後，壓力又恢複正常。也可能與單向閥閥球偶爾卡住有關。

解決辦法：

首先，對流動相進行充分脫氣，並確保溶劑瓶吸濾頭完全浸入液麵下，無氣泡吸入。其次，以較高流速（如3-5 mL/min）進行泵的Purge操作（不接色譜柱），持續5-10分鍾，可有效排出泵頭內的殘留氣泡。如果問題仍偶爾出現，可嚐試用異丙醇低流速衝洗係統，或對單向閥進行清洗。

Q3：換了一根新色譜柱後壓力變得不穩，而舊柱子沒問題，是柱子壞了嗎？

不一定。這種情況很可能是新色譜柱與係統連接處存在死體積或微滲漏。新柱子的接口螺帽或卡套可能因公差或安裝手法問題，未能與係統管路形成完美的零死體積連接，導致微小空隙，引起壓力波動和譜峰展寬。

解決辦法：

首先，重新安裝色譜柱：將柱子入口端接頭小心擰開，剪掉管路前端一小截（確保切口平整），按照正確手法（先手動旋緊，再用扳手旋轉1/4-1/2圈）重新擰緊。然後，用兩通代替柱子連接係統，觀察壓力是否平穩，以確認問題是否在柱子接口。如果重新安裝後問題依舊，再聯係供應商排查柱子本身的可能性（如柱床填充問題）。

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