目錄

第 1 章 前言 1

1.1 HPLC 法測定維生素含量的標準 1

1.2 儀器配置簡表 2

第 2 章 維生素 A 的含量測定 3

2.1 反相高效液相色譜法 3

2.2 正相高效液相色譜法 10

2.3 紫外分光光度計法 11

第 3 章 維生素 D 的含量測定 13

3.1 反相高效液相色譜法 13

3.2 正相高效液相色譜法 19

第 4 章 維生素 E 的含量測定 21

4.1 反相高效液相色譜法 21

4.2 正相高效液相色譜法 26

第 5 章 維生素 B1 的測定 29

5.1 儀器設備與試劑 29

5.2 實驗方法 30

5.3 實驗結果 31

第 6 章 維生素 B2 的測定 34

6.1 儀器設備與試劑 34

6.2 實驗方法 35

6.3 實驗結果 36

第 7 章 維生素 B3 (煙酸) 的測定 39

7.1 儀器設備與試劑 39

7.2 實驗方法 40

7.3 實驗結果 41

第 8 章 泛酸的測定 44

8.1 儀器設備與試劑 44

8.2 實驗方法 45

8.3 實驗結果 46

第 9 章 維生素 B6 測定 49

9.1 儀器設備與試劑 49

9.2 實驗方法 50

9.3 實驗結果 51

第 10 章 維生素 K1 的測定 54

10.1 儀器設備與試劑 54

10.2 實驗方法 55

第 11 章 葉酸的測定 56

11.1 儀器設備與試劑 56

11.2 實驗方法 56

第 12 章 維生素 B12 的測定 57

12.1 儀器設備與試劑 57

12.2 實驗方法 57

附錄 1 維生素標準溶液校正方法 59

第 1 章 前言

維生素（英語：Vitamin）是一係列有機化合物的統稱。它們是生物體所需要的微量營養成分，而一般又無法由生物體自己生產，需要通過飲食等手段獲得。維生素不能像糖類、蛋白質及脂肪那樣可以產生能量、組成細胞，但是它們對生物體的新陳代謝起調節作用。

維生素是食品中重要的營養成分，缺乏維生素會導致嚴重的健康問題，適量攝取維生素可以保持身體健康，過量攝取維生素卻會導致中毒；因此食品中維生素含量的檢測至關重要。國家頒布多項標準法規，對食品、保健品、食品添加劑等中維生素含量檢測進行規範，以保障食品安全。小黄鸭福利导航儀器參考國家標準及文獻，整理了食品中維生素檢測解決方案，供相關企業參考使用。

1.1 HPLC 法測定維生素含量的標準

第 2 章 維生素 A 的含量測定

2.1 反相高效液相色譜法

本節反相高效液相色譜法對維生素 A 進行檢測是參考 GB 5009.82-2016《食品安全國家標準 食品中維生素 A、D、E 的測定》，適用於需要參照 GB 5009.82-2016 對食品中維生素 A 進行檢測的用戶參考使用。

2.1.1 儀器設備與試劑

實驗過程中其它玻璃器皿還包括棕色容量瓶 (10mL、50mL)、1.5mL 塑料離心管、移液槍 (0~1000µL，0~5000µL)、移液槍槍頭 (1mL，5mL)、一次性注射器 (1mL)、針筒式濾膜 (0.45µm)、進樣針、一次性 PVC 手套、一次性口罩等。

2.1.2 實驗方法

標準溶液配製

維生素 A 標準儲備溶液 (0.500mg/mL)：準確稱取 25.0mg 維生素 A 標準品，用無水乙醇溶解後，轉移入 50mL 容量瓶中，定容至刻度，此溶液濃度約為 0.500mg/mL。將溶液轉移至棕色試劑瓶中，密封後，在 - 20℃下避光保存，有效期 1 個月。臨用前將溶液回溫至 20℃，並進行濃度校正。

維生素 A 標準溶液中間液：準確吸取維生素 A 標準儲備溶液 1.00mL 和維生素 E 標準儲備溶液各 5.00mL 於同一 50mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，此溶液中維生素 A 濃度為 10.0μg/mL，維生素 E 各生育酚濃度為 100μg/mL。在 - 20℃下避光保存，有效期半個月。

維生素 A 標準係列工作溶液：分別準確吸取維生素 A 標準溶液中間液 0.20mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL 於 10mL 棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，該標準係列中維生素 A 濃度為 0.20μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL、2.00μg/mL、4.00μg/mL、6.00μg/mL，臨用前配製。

樣品前處理

試樣製備：將一定數量的樣品按要求經過縮分、粉碎均質後，儲存於樣品瓶中，避光冷藏，盡快測定。

注意：樣品前處理使用的所有器皿不得含有氧化性物質；分液漏鬥活塞玻璃表麵不得塗油；處理過程應避免紫外光照，盡可能避光操作；提取過程應在通風櫃中操作。

皂化

不含澱粉樣品：稱取 2g~5g（精確至 0.01g）經均質處理的固體試樣或 50g（精確至 0.01g）液體試樣於 150mL 平底燒瓶中，固體試樣需加入約 20mL 溫水，混勻，再加入 1.0g 抗壞血酸和 0.1g BHT，混勻，加入 30mL 無水乙醇，加入 10mL~20mL 氫氧化鉀溶液，邊加邊振搖，混勻後於 80℃恒溫水浴震蕩皂化 30min，皂化後立即用冷水冷卻至室溫。

注：皂化時間一般 30min，如皂化液冷卻後液麵有浮油，需要加入適量氫氧化鉀溶液，並適當延長皂化時間。

含澱粉樣品：稱取 2g~5g（精確至 0.01g）經均質處理的固體試樣或 50g（精確至 0.01g）液體樣品於 150mL 平底燒瓶中，固體試樣需用約 20mL 溫水混勻，加入 0.5g~1g 澱粉酶，放入 60℃水浴避光恒溫振蕩 30min 後，取出，向酶解液中加入 1.0g 抗壞血酸和 0.1g BHT，混勻，加入 30mL 無水乙醇，10mL~20mL 氫氧化鉀溶液，邊加邊振搖，混勻後於 80℃恒溫水浴振蕩皂化 30min，皂化後立即用冷水冷卻至室溫。

提取：將皂化液用 30mL 水轉入 250mL 的分液漏鬥中，加入 50mL 石油醚 - 乙醚混合液，振蕩萃取 5min，將下層溶液轉移至另一個 250mL 的分液漏鬥中，加入 50mL 的混合醚液再次萃取，合並醚層。

注：如隻測維生素 A 與 α- 生育酚，可用石油醚作提取劑。

洗滌：用約 100mL 水洗滌醚層，約需重複 3 次，直至將醚層洗至中性（可用 pH 試紙檢測下層溶液 pH 值），去除下層水相。

濃縮：將洗滌後的醚層經無水硫酸鈉（約 3g）濾入 250mL 旋轉蒸發瓶或氮氣濃縮管中，用約 15mL 石油醚衝洗分液漏鬥及無水硫酸鈉 2 次，並入蒸發瓶內，並將其接在旋轉蒸發儀或氣體濃縮儀上，於 40℃水浴中減壓蒸餾或氣流濃縮，待瓶中醚液剩下約 2mL 時，取下蒸發瓶，立即用氮氣吹至近幹。用甲醇分次將蒸發瓶中殘留物溶解並轉移至 10mL 容量瓶中，定容至刻度。溶液過 0.45μm 有機係濾膜後供高效液相色譜測定。

2.1.3 色譜條件

流動相：甲醇/水

色譜柱：Supersil ODS2 5µm 4.6×250mm

或 Supersil PFP 5µm 4.6×250mm

或 Supersil C30 3µm 4.6×250mm

流量：1.0mL/min

檢測：UV325nm

或激發 328nm，發射 440nm

進樣體積：10μL

2.1.4 實驗結果

Supersil PFP 5µm 4.6×250mm 色譜柱分析結果

根據濃度和峰麵積數據，得到維生素 A 的線性曲線方程為：y=42.544x - 1.4395，R^{2}=1.000。因此維生素 A 在 0.2~10μg/mL 濃度範圍內，線性關係良好。

重複性：用濃度為 10μg/mL 維生素 A 標準溶液，連續進樣 6 針，峰麵積和保留時間 RSD 結果如下：

該色譜條件下，儀器的基線噪音為 0.0302mAU，根據信噪比S/N=3，計算得到維生素 A 的儀器小檢測濃度為 0.017μg/mL，實際方法檢出限為 3.5μg/100g，比國標的方法檢出限 10μg/100g，靈敏度高了不少。實際樣品分析AD 鈣奶樣品中維生素 A 的含量分析

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後續章節詳情：第 2 章剩餘內容（正相高效液相色譜法、紫外分光光度計法）及第 3 章至第 12 章（維生素 D、E、B 族、K1、葉酸、B12 等 11 類維生素的完整檢測方法、實驗結果及結論）；

高清資料：所有章節譜圖（圖 2-1 至圖 12-1）高清版（含峰形放大細節、基線噪聲標注）、實際食品樣品（乳製品、保健品、穀物）檢測原始譜圖；

驗證數據：各維生素線性方程、檢出限 / 定量限報告、不同基質加標回收率數據（85%-103%）、精密度驗證結果（RSD＜2%）；

操作指南：皂化 / 酶解操作視頻、固相萃取實操教程、色譜柱活化與維護細則；

附錄文件：GB 5009 係列、GB 14750 等標準原文節選、維生素標準溶液校正詳細步驟、耗材訂貨清單（色譜柱、試劑、濾膜型號編碼）。

下載通道

直接下載：www.hf-ld.com/ 食品維生素檢測方案

技術谘詢：400-66-35483